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細胞周期檢測實驗步驟
點擊次數(shù):11 更新時間:2025-07-21

細胞周期檢測實驗是一種通過流式細胞術(shù)來分析細胞在細胞周期各階段分布的實驗方法。這個實驗對于理解細胞的生長、分化和疾病狀態(tài)至關(guān)重要。

細胞周期檢測實驗步驟:

1. 收集細胞:A: 收集細胞5~20×105于離心管中,若細胞比較小(如淋巴細胞)400 g離心,若細胞比較大(如腫瘤細胞)300 g離心,5~10 min,棄去培養(yǎng)液;

2. 洗滌:加入1 mlPBS(提前放4℃預(yù)冷)洗滌1次,離心棄去上清;

3. 固定前處理:利用管底殘留的液體,輕彈管底,將沉淀重懸成細胞懸液,避免細胞成團;

4. 細胞固定:加入約1 ml -20℃預(yù)冷的無水乙醇中,輕輕吹打混勻,-20℃固定1 h或過夜;

5. 洗滌:加入1 mlPBS(提前放4℃預(yù)冷)洗滌1次,300 g離心10min,棄去上清;

6. RNA酶消化:300 g 離心 5 min,吸盡上清后,加入 100 μL 的 RNase A 并充分懸浮細胞,37°C 水浴 30 min。

7. PI染色:加入400μLPI溶液并充分混勻,4℃避光孵育30 min;

8. 上機檢測:用流式細胞儀在激發(fā)波長488nm波長處檢測紅色熒光,低速獲取細胞,采用分析軟件進行DNA含量分析。


聯(lián)系人:王經(jīng)理
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